دانلود ترجمه مقاله پروتکل پیشرفته برای جداسازی DNA ژنومیک گیاه

1. مقدمه 2. مواد و روش ها 2.1. مواد گیاهی 2.2. معرف ها و محلول ها 2.3. پروتکل 2.4. مقایسه ی راندمان پروتکل های استخراج 2.5. تقویت AFLP-PCR 2.6. آنالیز داده های آماری 2.7. آنالیز داده های مولکولی 3. نتایج و بحث و بررسی 3.1. ارزیابی کیفیت و عملکرد DNA 3.2. ارزیابی پروتکل توسعه یافته جدید با استفاده از مارکر AFLP

چکیده - یک روش قابل تکثیر برای استخراج DNA ژنومیک با کیفیت بالا (gDNA) مناسب برای کاربرد در چندین روش مبتنی بر PCR بعد از اصلاحات روش دالپورتا توسعه یافت. تغییرات در بافر عصاره شامل استفاده از غلظت بالاتر سدیم کلرید، جایگزینی بتا مرکاپتواتانول با سدیم متابی سولفیت و استفاده از پلی اتیلن گلیکول برای رسوب DNA می باشد. در مقایسه با روش اصلی و دو پروتکل دیگر تست شده، پروتکل پیشرفته ما منجر به جداسازی gDNA با خلوص و عملکرد خوب گردید. محتوای DNA استخراج شده توسط طیف سنجی مورد ارزیابی قرار گرفت و کیفیت آن نیز توسط پلی مورفیسم های با طول قطعه تقویت شده (AFLP) آنالیز شد. مشخصات AFLP DNA به دست آمده با پروتکل ما قابل مقایسه با مشخصات کیت تجاری برای استخراج DNA گیاه می باشد. پتانسیل این روش پیشرفته متکی بر استفاده موفق از این روش با مارکرهای مولکولی مختلف با استفاده از gDNA استخراج شده از بافت های تازه و منجمد انواع گیاهان آوندی از جمله موز در این مقاله، و گندم، گواوا، نیشکر، لوبیا و همچنین میکروجلبک می باشد. بنابراین، پروتکل جدید یک گزینه مناسب، متداول و اقتصادی برای استفاده و مطالعه ی زمینه های مختلف ژنومیک می باشد. مقدمه: جداسازی DNA ژنومیک همیشه یک مساله مهم در حوزه ی بیولوژی مولکولی گیاه می باشد. به صورت ایده آل، این روش باید ساده، سریع، کارامد و قابل تکثیر باشد. علاوه بر این، این روش باید برای استخراج انواع متعدد نمونه ها مناسب بوده و مقدار بالا و با کیفیت خوبی از DNA با حداقل خطر برای اپراتور را تولید کند. کیفیت یک مساله حیاتی برای مطالعات ژنومیک و اکثر آنالیزهای مبتنی بر تکثیر می باشد، چون تکثیر DNA می تواند توسط حضور مهار کننده های خالص تحت تاثیر قرار گیرد که این امر کارایی PCR بعدی را نیز کاهش می دهد (جارا و همکاران، 2008، انورادها و همکاران، 2013). پروتکل های متعددی برای جداسازی DNA گیاه منتشر شده است (به عنوان مثال، دویل 1990، گاول و جارت، 1991، اسکوت و پلای فورت، 1996، لی و همکاران، 2001، مووگ و بوند، 2003، هامیس و همکاران، 2004). کیت های تجاری موجود برای جداسازی DNA توان بالاتری را ارائه داده و نیروی کارگری را نیز کاهش می دهند، اما این کیت ها همیشه برای همه ی مواد گیاهی قابل کاربرد نیستند. علاوه بر این، قابلیت دسترسی به این کیت ها و هزینه بالای آن ها می تواند در برخی کشورهای توسعه یافته، به ویژه هنگام حمل تعداد زیاد نمونه ها و در نظر گرفتن آزمایشات با منابع مالی محدود، عاملی محدود کننده در استفاده از این کیت ها باشد (باشلاکهانو و راجورا، 2008، نیو و همکاران، 2008).

A reproducible method for extraction of high-quality genomic DNA (gDNA) suitable for application in several PCR-based methods was developed after modifications to the Dellaporta method. Changes to the extraction buffer include the use of a higher concentration of NaCl, substitution of β-mercaptoethanol with sodium-metabisulfite, and the use of polyethylene glycol for DNA precipitation. Compared to the original method and two other protocols tested, our improved protocol resulted in the isolation of a good yield and purity of gDNA. The content of extracted DNA was spectrophotometrically evaluated, and the quality was analyzed by Amplified Fragment Length Polymorphisms (AFLP). AFLP profiles of the DNA obtained with our protocol were comparable to those of a commercial kit for plant DNA extraction. The potential of this improved method relies on its successful use with different molecular markers using gDNA extracted from fresh and frozen tissues of a variety of vascular plants, including banana in this paper, and proven in wheat, guava, sugarcane, and bean, as well as from microalgae. Therefore, the new protocol is an adequate, convenient and economical choice for use and study of various fields of genomics. Introduction: Isolation of genomic DNA is always an important issue in the field of plant molecular biology. Ideally, the method should be simple, rapid, efficient, and reproducible. In addition, it must be suitable for extracting multiple types of samples and generate a high quality and quantity of DNA with minimal risk for the operator. Quality is of critical concern for genomic studies and most amplification-based analyses because DNA amplification can be influenced by the presence of co-purifying inhibitors, which reduce subsequent PCR efficiency (Jara et al. 2008; Anuradha et al. 2013). Numerous protocols for isolation of plant DNA have been published (e.g., Doyle and Doyle 1990; Gawel and Jarret 1991; Scott and Playford 1996; Li et al. 2001; Mogg and Bond 2003; Haymes et al. 2004). Commercially available DNA isolation kits provide higher throughput and reduced labor time, though this is not always true for all plant materials.Additionally, their availability and high cost can be limiting in certain developing countries, especially when handing a large number of samples and considering experiments with limited financial resources (Bashalkhanov and Rajora 2008; Niu et al. 2008).

بخشی از ترجمه مقاله (صفحه 9 فایل ورد ترجمه)