دانلود ترجمه مقاله مشخصات اگزوزوم های حاصل از پلاسما در ماهی دریایی Rock Bream

1. مقدمه 2. مواد و روش ها 3. نتایج 4. بحث و بررسی 5. نتیجه گیری

چکیده – اگزوزوم ها واسطه های مهم ارتباط بین سلولی بوده و بسیاری از فرایندهای فیزیولوژیکی و پاتولوژیکی را تعدیل می بخشند. دانش چندانی در رابطه با ترشح، محتوا و عملکردهای بیولوژیکی اگزوزوم های ماهی در طول عفونت پاتولوژیکی به دلیل عدم وجود تکنیک های جداسازی استاندارد و مناسب وجود ندارد. در این مطالعه، هدف ما جداسازی اگزوزوم ها از پلاسمای ماهی دریایی rock bream (Oplegnathus fasciatus) توسط دو روش جداسازی است. اولتراسانترفیوژ افتراقی (UC) و تکنیک تجاری ستون چرخشی با میل به غشاء (کیت). ویژگی های مورفولوژیکی و فیزیکوشیمیایی اگزوزوم های جداسازی شده توسط این دو روش مشخص شد و کارایی این روش ها با هم مقایسه شد. انتظار می رفت که اگزوزوم های جداسازی شده به کمک این روش ها دارای اندازه ای در محدوده 200 – 30 نانومتر بوده و در زیر میکروسکوپ فنجانی شکل باشند. علاوه بر این، اگزوزوم های دست نخورده با استفاده از روش مبتنی بر کیت نسبت به روش UC شناسایی شد. آنالیز ردیابی نانوذرات جمعیت ناهمگنی از اگزوزوم ها با میانگین قطره ذره 6/114 × 6/4 و 2/111 × 2/2 نانومتر را به ترتیب توسط روش UC و روش مبتنی بر کیت نشان داد. غلظت ذرات به دست آمده توسط روش کیت (05/1 در 11 10 ± 23/1 ×10 10 ذرات در میلی لیتر) ده برابر بالاتر از غلظت ذرات به دست آمده توسط UC بود (90/4 در 10 10 ± 91/2 در 9 10 ذرات در میلی لیتر). روش کیت دارای عملکرد پروتئین کل نسبتا بالاتری (86/1 میلی گرم) و بازیابفت پروتئین اگزوزوم بالاتری است (55/0 میلی گرم در میلی لیتر پلاسما). آنالیز ایمونوبلات نشان دهنده وجود پروتئین های مارکر اگزوزوم (CD81, CD63 و HSP90 ) در اگزوزوم های جداسازی شده توسط هر دو روش بوده و وجود اگزوزوم ها را پیشنهاد می دهد. با این حال، عدم سمیت سلولی یا واکنش های ایمنی نامطلوب در سلول های ماهی و پستانداران توسط اگزوزوم های جداسازی شده توسط روش UC بیانگر مناسب بودن آن برای مطالعات عملکردی در شرایط آزمایشگاهی (برون تنی) است. به طور کلی، نتایج تعیین مشخصات پایه ما نشان داد که روش مبتنی بر کیت برای جداسازی اگزوزوم های با خلوص بالا از پلاسمای ماهی مناسب تر است، در حالی که روش UC دارای ایمنی بالاتری از نظر بازدهی اگزوزوم ها با سمیت پایین است. این مطالعه شواهدی در رابطه با وجود اگزوزوم های معمولی در پلاسمای ماهی rock beam نشان می دهد و انتخاب یک روش کارامد جداسازی اگزوزوم برای کاربردهای آینده در حوزه تشخیص بیماری و اگزوزوم درمانی به عنوان یک دارو برای ماهی را تسهیل می بخشد.

Exosomes are important mediators of intercellular communication and modulate many physiological and pathological processes. Knowledge of secretion, content, and biological functions of fish exosomes during pathological infection is still scarce due to lack of suitable standardized isolation techniques. In this study, we aimed to isolate exosomes from the plasma of marine fish, rock bream (Oplegnathus fasciatus), by two isolation methods: differential ultracentrifugation (UC) and a commercial membrane affinity spin column technique (kit). Morphological and physicochemical characteristics of the isolated exosomes were determined by these two methods, and the efficiencies of the two methods were compared. Exosomes isolated by both methods were in the expected size range (30–200 nm) and had a characteristic cup-shape in transmission electron microscopy observation. Moreover, more intact exosomes were identified using the kit-based method than UC. Nanoparticle tracking analysis demonstrated a heterogeneous population of exosomes with a mean particle diameter of 114.6 ± 4.6 and 111.2 ± 2.2 nm by UC and a kit-based method, respectively. The particle concentration obtained by the kit method (1.05 × 1011 ± 1.23 × 1010 particles/mL) was 10-fold higher than that obtained by UC (4.90 × 1010 ± 2.91 × 109 particles/mL). The kit method had a comparatively higher total protein yield (1.86 mg) and exosome protein recovery (0.55 mg/mL plasma). Immunoblotting analysis showed the presence of exosome marker proteins (CD81, CD63, and HSP90) in the exosomes isolated by both methods and suggests the existence of exosomes. However, the absence of cytotoxicity or adverse immune responses to fish and mammalian cells by the exosomes isolated by the UC procedure indicates its suitability for functional studies in vitro. Overall, our basic characterization results indicate that the kit-based method is more suitable for isolating high-purity exosomes from fish plasma, whereas UC has higher safety in terms of yielding exosomes with low toxicity. This study provides evidence for the existence of typical exosomes in rock beam plasma and facilitates the selection of an efficient exosome isolation procedure for future applications in disease diagnosis and exosome therapy as fish medicine.

ترجمه این مقاله در 23 صفحه آماده شده و در ادامه نیز صفحه 16 آن به عنوان نمونه قرار داده شده است که با خرید این محصول می توانید، فایل WORD و PDF آن را دریافت نمایید.