دانلود ترجمه مقاله بیان دگر ساخت IL-29 انسانی (IFN-λ1) در Lizard Leishmania

1. مقدمه 2. اهداف 3. مواد و روش ها 4. نتایج 5. بحث و بررسی

چکیده - پیشینه: اینترفرون هایی با کارکردهای مختلفی مانند فعالیت های ضدویروسی، ضدانتشار و تنظیم کننده ایمنی، درمان های دارویی موثری برای تعدادی از بیماری ها می باشند. یکی از این اینترفرون های جدید (IFN ها)، اینترلوکین-29 (IL-29) که متعلق به خانواده IFN-λ است فعالیت ضدویروسی دارد و همراه با IFN-α در درمان ابتلا به HCV قوی بوده است که این موضوع مورد بررسی قرار گرفته است (کارآزمایی بالینی مرحله 2). IL-29 ترکیب شونده قبلاً در چندین سیستم بیان تولید شده است اما در این مطالعه، این پروتئین را در یک «Lizard leishmania» ایرانی (ILL) برای اولین بار کلون و بیان کردیم. اهداف: هدف اصلی این پژوهش، ارزیابی بیان IL-29 انسانی کارکردی در Lizard leishmania داخلی به عنوان یک سیستم بیان یوکاریوتیی جایگزین، می باشد. مواد و روش ها: کاست بیان IL-29 در یک بردار pLEXSY ساخته شد. سلول های leishmania بوسیله الکتروپوریشن، ترافرست شدند. بعد از انتخاب ترانسفکتانت، بیان پروتئین در سطوح RNA و پروتئین، ارزیابی شد. نتایج: کاست بیان با موفقیت به سلول های «لیشمانیا» منتقل شدند و بیان IL-29 بازترکیب شونده توسط RT-PCR و پاکسازی غربی، تایید شد. پروتئین تصفیه شده، 20% فعالیت در مقایسه با پروتئین استاندارد نشان داد. حذف آنزیمی ان-گلیکان باعث جابجایی تحرک پروتئین بر SDS-PAGE شد. نتیجه گیری: جابجایی آسان و کشت این میزبان یوکاریوتی و سلول پستاندار مانند اصلاح های پس از ترجمه، مزیت های اصلی این میزبان بیان می باشند، اما بازده بیان این پروتئین بسیار کم بود و بنظر می رسد برای تولید مقیاس بزرگ، مقرون به صرفه نباشد.

Background: Interferons with different functions such as antiviral, antiproliferative and immunomodulatory actions are effective medications for a number of diseases. One of these new interferons (IFNs) is Interleukin-29 (IL-29) belongs to the family of IFN-l has antiviral activity and its potent in accompanying with IFN-? in treatment of HCV infection has been evaluated (clinical trial phase II). Recombinant IL-29 has been previously produced in multiple expression systems but in this study we cloned and expressed this protein in an Iranian Lizard leishmania (I.L.L) for the first time. Objectives: The Main objective of this research was to evaluate expression of functional human IL-29 in domestic Lizard leishmania as an alternative eukaryotic expression system. Materials and Methods: The IL-29 expression cassette was constructed into a pLEXSY vector. The leishmania cells were transfected by electroporation. After selection of transfectants, the protein expression was evaluated at RNA and protein levels. Results: Expression cassette was successfully transfected to leishmania cells and expression of recombinant IL-29 was proved by RT-PCR and western blotting. Purified protein showed 20% activity compared to standard protein. Enzymatic removal of N-glycan resulted to the shift of protein mobility on SDS-PAGE. Conclusions: Easy handling and culture of this eukaryotic host and mammalian cell like posttranslational modifications are the main advantages of this expression host, but the expression yield of this protein is very low and it seems to be not economic for large-scale production.