دانلود ترجمه مقاله قطع بهینه ژن بوسیله هسته برنامه پذیر تحویل داده شده توسط بردار

1. مقدمه 2. نتایج 3. بحث و بررسی 4. مواد و روش ها

چکیده - اصلاح ژنتیک هدفدار با استفاده از هسته های برنامه پذیر مانند هسته های انگشت روی (ZFN) و هسته های اثرگذار شبیه به اکتیواتور رونویسی (TALEN) از ارزش بسیاری در پژوهش بیوپزشکی ، پزشکی، و بیوتکنولوژی برخوردار است. بردارهای مینی دایره ای، که از دنباله های باکتریال بیگانه برخوردار نیستند، چندین مزیت نسبت به پلاسمیدهای متداول برای تحویل تراژن، دارند. در اینجا، برای اولین بار، ما هسته های برنامه پذیر را با استفاده از ترافرست گذرای یک بردار مینی دایره وارد سلولهای انسانی کردیم و نتایج را با نتایج بدست آمده با استفاده از یک پلاسمید متداول مقایسه کردیم. بررسی های گزارشگر جایگزین و تحلیلهای اندونوکلئاز T7 آشکار کرد که سلول های درون گروه بردار مینی دایره، فراوانی جهش بسیار بالاتر در سایت های هدف نسبت به گروه پلاسمید متداول از خود نشان دادند. PCR کمیتی و ترانویسی-PCR معکوس، بترتیب تعداد رونویسی بردار و سطوح ترانویسی نوکلئاژ برنامه پذیر بیشتری را در سلول های 293T بعد از مینی دایره از نظر ترافرست بردار پلاسمید متداول، نشان دادند. علاوه بر آن، لکه گذاری آبی تریفان و سیتومتری (سلول سنجی) جریان بعد از لکه گذاری آنکسین V و پروپیدیوم یود نشان داد که ماندگاری سلول نیز به میزان معناداری در گروه مینی دایره نسبت به گروه پلاسمید متداول بیشتر بود. در کل، نتایج ما نشان داد که قطع ژن با استفاده از تحویل ZFN ها و TALEN ها به واسطه بردار مینی دایره ، یک روش کارآمدتر، سالمتر و کمتر سمی نسبت به استفاده از یک پلاسمید متداول است و نشان می دهد که بردار مینی دایره می تواند به عنوان یک روش تحویل پیشرفته برای نوکلئاز برنامه پذیر عمل کند.

Targeted genetic modification using programmable nucleases such as zinc finger nucleases (ZFNs) and transcription activator-like effector nucleases (TALENs) is of great value in biomedical research, medicine and biotechnology. Minicircle vectors, which lack extraneous bacterial sequences, have several advantages over conventional plasmids for transgene delivery. Here, for the first time, we delivered programmable nucleases into human cells using transient transfection of a minicircle vector and compared the results with those obtained using a conventional plasmid. Surrogate reporter assays and T7 endonuclease analyses revealed that cells in the minicircle vector group displayed significantly higher mutation frequencies at the target sites than those in the conventional plasmid group. Quantitative PCR and reverse transcription-PCR showed higher vector copy number and programmable nuclease transcript levels, respectively, in 293T cells after minicircle versus conventional plasmid vector transfection. In addition, tryphan blue staining and flow cytometry after annexin V and propidium iodide staining showed that cell viability was also significantly higher in the minicircle group than in the conventional plasmid group. Taken together, our results show that gene disruption using minicircle vector-mediated delivery of ZFNs and TALENs is a more efficient, safer and less toxic method than using a conventional plasmid, and indicate that the minicircle vector could serve as an advanced delivery method for programmable nucleases.